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凱氏方法測定肝臟中蛋白質(zhì)的含量

2022.07.27

動物肝臟具有非常高的蛋白質(zhì)，尤其是豬、牛、羊，也是人們餐桌上的美食。蛋白質(zhì)是一切生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是機(jī)體細(xì)胞的重要組成部分，是人體組織更新和修補(bǔ)的主要原料。蛋白質(zhì)是構(gòu)成人體必需的催化和調(diào)節(jié)功能的各種酶，具有催化、促進(jìn)食物的消化吸收利用的作用。動物蛋白攝入過量可能會導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥。因為多數(shù)動物蛋白質(zhì)都是酸性的，需要在體內(nèi)中和。這些酸在骨骼中被緩沖，最終導(dǎo)致骨骼中的鈣發(fā)生流失，從而引發(fā)潛在的骨質(zhì)疏松癥。此外，令人擔(dān)憂的是長期高蛋白質(zhì)攝入可能會增加腎臟的負(fù)擔(dān)，導(dǎo)致腎臟出現(xiàn)病變。對此專家們也是各持己見，有些專家建議每天攝入120克蛋白質(zhì)，另一些專家則建議每天每公斤體重攝入1.5~2克蛋白質(zhì)。

通過N310凱氏定氮儀測定肝臟中蛋白質(zhì)含量，自動化操作，節(jié)省人力物力。

一、儀器

凱氏定氮儀（N310，格丹納）

二、試劑
硫酸鉀K₂SO₄、五水硫酸銅、濃硫酸、雙氧水

三、操作部分
1、稱取肝臟2g樣品，精度為0.1mg，樣品均勻，放在消化管內(nèi)，然后加入7g硫酸鉀K₂SO₄、0.8g五水硫酸銅、12ml濃硫酸H2SO4（98%）輕輕搖晃消化管，將其混勻，如果樣品脂肪含量高，則需要用15ml濃硫酸，5ml雙氧水。

2、消解儀設(shè)定好程序，啟動開始415度開始消化45分鐘，將消化管冷卻到50~60℃。

3、將消化管放在蒸餾室的位置上,通過控制面板設(shè)定好定氮方法，按開始鍵進(jìn)行工作，定氮儀自動加酸，自動加堿，自動蒸餾，自動淋洗，實驗中的參數(shù)如下：
稀釋水=75ml
H₃BO₃=30ml
NaOH=50ml
凱氏定氮儀是采用手動滴定，滴定液：HCl 0.2mol/L，滴定出結(jié)果。

N310凱氏定氮儀具有蒸汽溫度監(jiān)控，保證各樣品的蒸餾時間真實一致；無需專門配置水龍頭和冷水機(jī)，可在實驗室內(nèi)自由擺放，節(jié)約寶貴的實驗室空間，每年可以為實驗室節(jié)約大量的水資源與水費用的支出。

參考：AOAC，“Official methods of analysis”, method 981.10

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